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ArciTect™ 产品系列是一个 CRISPR-Cas9 基因组编辑系统,采用由纯化的 Cas9 蛋白和定制合成的向导 RNA 组成的核糖核蛋白 (RNP) 复合物。与以往采用质粒或mRNA系统的技术相比,基于RNP的系统能在难转染细胞(包括干细胞和原代细胞)中实现CRISPR机制的高效递送与表达。一旦进入细胞,RNP复合物不会诱导细胞免疫反应,并会及时降解以减少脱靶效应(表1)。 ArciTect™ 系统采用经过验证的试剂和方案,使您能够在自己的实验室中进行高效的基因组编辑并生成功能性基因编辑细胞。

克服效率难题

采用基于RNP的CRISPR-Cas9系统,克服了CRISPR机制递送与表达的效率难题。ArciTect™使研究人员能在难操作的细胞类型(包括干细胞和原代细胞)中实现高效的基因组编辑。

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为什么选择 ArciTect™ ?

  • 通过使用 RNP 复合物,在难以操作的细胞类型中实现最大化的递送与表达效果。
  • 借助集成的向导 RNA 设计工具和针对不同细胞类型的操作流程,简化基因组编辑过程。
  • 使用即用型纯化 Cas9 蛋白和合成向导 RNA,更快速获得实验结果。
  • RNP 复合物可在适时降解,降低潜在脱靶切割风险,提升编辑精度。
Genome editing workflow

图1所示。基因组编辑工作流程

表1。不同CRISPR方法的比较。1


基因组编辑方案与数据

探索使用 CRISPR-Cas9 在多种细胞系(包括干细胞和原代细胞类型)中进行高效基因组编辑的逐步操作指南。这些操作流程经过优化和验证,配有实际案例研究和支持性数据,并涵盖关键的细胞培养注意事项及评估编辑效率的方法。

人多能干细胞(hPSCs)

使用电穿孔和化学转染技术在hPSCs中的进行基因敲除与敲入。
案例研究:通过GFP到BFP的转化进行基因敲除和敲入优化。

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人原代T细胞

使用电转化技术在人初级 T 细胞中进行基因敲除。
案例研究:评估对人原代T细胞高效敲除TRAC的最佳培养方法。

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CD34+ 人造血干细胞与祖细胞(HSPCs)

使用电穿孔技术敲除造血干细胞(HSPC)中的基因。
案例研究:评估高效 TRAC 基因敲除的最佳细胞培养方法。

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人类肠类器官

使用电穿孔技术对人类成体干细胞衍生的肠道类器官进行基因敲除。

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人类肝类器官

使用电穿孔技术在人类肝类器官中进行基因敲除

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人类自然杀伤(NK)细胞

使用电穿孔技术对人类 NK 细胞进行基因敲除。

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基因组编辑产品

向导 RNA(gRNA)

ArciTect™ sgRNA

产品特点:

  • 单链向导 RNA(sgRNA),将 crRNA 和 tracrRNA 区域整合于同一分子中
  • 由 ArciTect™ crRNA 和 ArciTect™ tracrRNA 组成的双组分 gRNA 系统
  • 兼容所有 Cas9 核酸酶

应用:

  • 使用 ArciTect™ sgRNA 或 ArciTect™ crRNA 与 tracrRNA 引导 Cas9 核酸酶至特定靶位点

Cas9

产品特点:

  • RNP 复合物在转染后立即发挥活性。
  • 所有版本的Cas9都包含一个核定位信号(NLS),可快速转运至细胞核内。

应用:

  • 使用 ArciTect™ Cas9 核酸酶在基因组特定位点产生双链断裂。
  • 使用 ArciTect™ Cas9-eGFP 核酸酶优化转染条件。

阳性对照试剂盒

产品特点:

  • ArciTect™ 人类 CRIS。PR 优化试剂盒基于流式细胞术设计,可快速优化人细胞中的基因组编辑条件
  • 经验证可与 ArciTect™ 系列产品联合使用,用于基因组编辑实验。

应用:

  • ArciTect™ 人类 CRISPR 优化试剂盒可用于快速量化基因组编辑效率,并可作为阳性对照。
  • ArciTect™ 人类 HPRT 引物混合物可用于T7核酸内切酶实验评估切割效率。
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CRISPR 设计工具

CRISPR向导设计工具采用最佳实践和最新计算工具,为人类和小鼠基因组中的每个基因提供最优CRISPR RNA(crRNA)或单链向导RNA(sgRNA)序列


科学资源

Wiley 电子书:基因组编辑应用

了解使用CRISPR进行下一代疾病建模,包括复杂细胞培养模型的全面基因组编辑策略、实验条件优化建议以及常见问题排查技巧。

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参考文献

  1. 梁欣等(2015)Cas9蛋白转染快速高效的哺乳动物细胞工程。[J] .生物医学工程学报。2008:44-53。
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