GloCell™ 可固定活性染料
通过排除死细胞来提高流式细胞术数据的准确性
GloCell™ 可固定活性染料(GloCell™ Fixable Viability Dyes)是一种荧光胺标记染料,用于区分活/死哺乳动物细胞,可在流式细胞术数据中清晰排除死细胞干扰。该染料还支持通过荧光显微镜观察活细胞与死细胞的视觉差异,并兼容细胞内抗体染色实验流程。
为什么在流式细胞术中排除死细胞很重要?
在细胞凋亡早期阶段,非活性细胞开始丧失结构完整性并逐渐增加通透性。流式细胞实验中,抗体会穿过受损的细胞膜非特异性结合死细胞,导致假阳性结果并降低数据质量。死细胞的自发荧光强度也显著高于活细胞,这会干扰稀有细胞群或弱阳性标志物的检测。虽然通过设门可粗略区分活/死细胞群,但仅依靠散射光分析难以完全排除所有死细胞。使用活/死细胞染色染料能有效缓解这些问题。
GloCell™ 染料是如何工作的?
GloCell™ 固定活性染料是活细胞/死细胞染色染料,不可逆地结合细胞表面和细胞内胺基。对于活细胞,GloCell™ 染料不能穿过完整的细胞膜,只能标记细胞表面少量胺基。相反,死细胞受损的细胞膜允许 GloCell™ 染料接触到更多的细胞内胺基,从而产生比活细胞更高的荧光。荧光强度的差异使用户能够清楚地区分活细胞和死细胞群,确保流式细胞术结果的可靠性。

图1所示. 活/死细胞染色用GloCell™固定式活性染料
(A)在死细胞中,GloCell™染料与细胞表面和细胞内胺基结合。(B)在活细胞中,GloCell™染料仅与细胞表面胺基结合。(C)活的和死的外周血单个核细胞用 GloCell™固定活力染料紫510 (目录# 75010)。
为什么使用可固定活性染料?
用可固定活性染料标记的细胞即使在固定、渗透和洗涤后也能保持荧光强度。这使得样品在固定后,仍可轻松鉴别和评估活细胞与死细胞。

图2. 用GloCell™可固定活性染料染色的非固定和固定细胞中荧光信号的保存
将WLS-1C人诱导多能干细胞(iPS)的活细胞和死细胞(在95°C热休克30分钟)混合后,使用 GloCell™固定活力染料紫450 (目录#75009)在4%多聚甲醛固定或未固定的条件下染色。染色后立即进行流式细胞术分析(A)未固定细胞和(B)固定细胞。
为什么使用 GloCell™ 染料?
- 灵活。适用于广泛的激发和发射波长范围。可用于荧光显微镜,流式细胞术,和细胞内抗体染色方案。
- 稳定。耐受固定、透化和洗涤处理。
- 兼容。经验证,可与我们的EasySep™和RosetteSep™细胞分选产品一起使用。