EasySep™小鼠TIL（CD45）正选试剂盒
如何从全血制备白膜层？
白膜层是由来源于全血或骨髓的浓缩的白细胞悬液组成。从全血样本制备白膜层有助于浓缩大体积的样本并且减少下游细胞分选的操作。此外，由于从样本中去除了供体特异的可溶性血清因子，因此使用白膜层可以减少供体的变异性。以下实验流程描述了如何从全血样本制备可用于下游分析或使用免疫磁珠细胞分选技术（如EasySep™）分离特定的细胞。
Materials
- 全血样本（采集后需添加抗凝剂）
- 根据您使用的细胞分选试剂盒的产品说明书推荐的试剂，包括：
- EasySep™ 缓冲液（产品号 #20144）
- RoboSep™ 缓冲液 (产品号 #20104）
- 含有2%胎牛血清的磷酸盐溶液（PBS + 2% FBS，产品号 #07905）
- 离心管
实验流程
- 在全血样本中加入等量的推荐试剂，轻轻混合。
- 室温下（15 - 25°C），800 x g，离心10分钟（离心速度需缓升缓降）。
- 吸取浓缩的白细胞层（即白膜层），加上一小部分血浆和浓缩的红细胞（RBCs）。其目的是浓缩白细胞至大约5倍，同时保持白细胞和RBCs的等比例（例如，当起始全血为10 mL时，可收集2 mL的白膜层）。
注意：尽管RosetteSep™和大多数EasySep™ Direct试剂盒已被优化可直接用于全外周血，但只需满足以下条件，就可以从白膜层中富集细胞：
- 每个有核细胞中至少含100个RBCs。
- 样本中有核细胞的浓度不超过5 x 107 cells/mL。
STEMCELL Technologies提供各种工具和产品，用于从全血、白膜层、脾脏和淋巴结分离细胞，并且不受一定RBC比例或细胞浓度的限制。
