EasySep™小鼠TIL（CD45）正选试剂盒
如何从存放时间较长的血液样本去除粒细胞？
粒细胞的密度会随着血液样本存放的时间而改变。当通过密度梯度离心从存放时间较长的血液样本（收集后存放超过24h）中分选单个核细胞时，可能会有粒细胞的污染。因此可使用Lymphoprep™或Ficoll™，通过密度梯度离心的方法来高效地去除人全外周血样本中的粒细胞。
以下实验操作描述了如何使用RosetteSep™人粒细胞去除抗体混合物通过免疫密度细胞分选的方法来去除粒细胞。此外，我们还提供了另一种实验方案，使用SepMate™离心管通过一次简单的倾倒来收集单个核细胞。在密度梯度离心之前进行免疫密度细胞分选，可使得血液样本中的粒细胞比例小于1%，而若只进行密度梯度离心，血液样本中粒细胞比例大约有20%。
方案一：使用普通离心管进行密度梯度离心
实验材料
- 全血样本（采集后需添加抗凝剂
- RosetteSep™人粒细胞去除抗体混合物（产品号 #15624）
- 含有2%胎牛血清（FBS）的磷酸盐溶液（PBS）（产品号 #07905）
- Lymphoprep™（产品号 #07801）
- 离心管
实验步骤
实验开始之前，请确保全血样本、PBS + 2% FBS、Lymphoprep™以及离心机均为室温（15 - 25ºC）。
- 每mL全血加入50 µL RosetteSep™人粒细胞去除抗体混合物，室温下孵育20分钟。
- 加入等体积的PBS + 2% FBS稀释全血，混合均匀。
- 将稀释后的样本加到Lymphoprep™液面上。
注意：尽量避免密度梯度离心液与样本混合。 - 室温下，1200 x g离心20分钟。
注意：关闭离心机刹车，即离心速度缓升缓降。 - 从Lymphoprep™和血浆之间的界面收集富集的细胞。
- 使用PBS + 2% FBS清洗收集的细胞。
- 重复清洗步骤。
方案二：使用SepMate™管进行密度梯度离心
实验材料
- 全血样本（采集后需添加抗凝剂）
- RosetteSep™人粒细胞去除抗体混合物（产品号 #15624）
- Dulbecco's Phosphate Buffered Saline with 2% Fetal Bovine Serum (PBS + 2% FBS, （产品号 #07905）
- Lymphoprep™（产品号 #07801）
- SepMate™-15（产品号 #85415）或SepMate™-50（产品号 #85450）
实验步骤
实验开始之前，请确保全血样本、PBS + 2% FBS、Lymphoprep™以及离心机均为室温（15 - 25ºC）。
- 每mL全血加入50 µL RosetteSep™人粒细胞去除抗体混合物，室温下孵育10分钟。
- 加入等体积的PBS + 2% FBS稀释全血，混合均匀。
- 将Lymphoprep™通过SepMate™管中的孔加入到插件中。
- 沿着SepMate™管的管壁，将稀释的样本加入。
- 室温下，1200 x g离心20分钟。
注意：开启离心机刹车，即离心速度无需缓升缓降。 - 将包含单个核细胞的上层溶液快速倾倒至一个新的试管中。
注意：切勿倒置SepMate™管超过2s。 - 使用PBS + 2% FBS清洗收集的细胞。
- 重复清洗步骤。
注意： 为了最大化减少血小板污染，可在收集细胞之前去除掉血浆液面上层的三分之一。或者在步骤8之后，通过120 x g，室温下离心10分钟（关闭刹车）来去除血小板。
