与培养其他贴壁细胞相比，人多能干细胞（hPSC）的培养体系更敏感，需更加仔细的监控和细胞处理，这对于长期维持​健康细胞未分化状态至关重要。

尽管外观评估比较主观，但肉眼可见的形态变化是hPSC质量评价的敏感指标。应每天通过光学显微镜监测细胞的质量，并检查其是否可以传代。

应该注意的是，并非所有的外观变化都提示细胞质量下降。实际培养过程中可能看到由多种因素（包括实验者的经验和技术水平）而引起的变化是正常的。本技术窍门介绍了高质量细胞应具备形态、一些常见的正常变化，以及可能提示细胞质量差的其它变化。

健康的集落形态以及正常变化

在传代后的头几天较难评估hPSC的质量，但随着集落的成熟，评估变得更加容易。这通常发生在最佳传代时间之前约48小时。在低放大倍率下，健康和高质量的hPSC应该表现出以下特征：

• 集落呈圆形
• 细胞排列紧密，具有很高核质比，细胞核几乎占据整个细胞
• 核仁显著
• 集落会无缝的融合起来，并在相衬显微镜下观察发亮

可能影响集落外观的一些因素包括，自上次传代或换液后的天数、使用的细胞系、使用的培养基、传代方法，和使用的基质。您可能会注意到以下一些变化，这些变化被认为是正常现象，并不一定提示细胞质量差：

1. 传代后的最初几天出现“刺状”的集落边缘和较松散的细胞排列
   铺板后最多4天，随着集落的扩散和形成，其排列可能会变松。此时不必担心可能出现的刺状集落边缘。在该时期过后，集落的密度迅速增加，且形态会在传代前的最后1-2天中发生显著变化。
   
   
   

   图2. 传代后两天的人胚胎干（ES）（H9）细胞呈现刺状边缘（橙色箭头）

2. 不对称和/或合并的集落
   集落可能有些不对称并发生融合，尤其是在传代时。这通常无需引起太多关注。当团块以低密度接种且分布不均匀时，也可能发生集落合并。同样，这通常也不必引起注意。集落的对称性不仅在细胞系之间存在差异性，而且受到不同包被基质影响，在Vitronectin XF™中培养的hPSC通常更加紧密和对称。
   
   
   

   图3. （A）在Vitronectin XF™上培养的人诱导多能干（iPS）细胞（WLS-1C）和（B）在Corning^®Matrigel^®上培养的人ES细胞（H9）

以下部分列举一些可能提示细胞质量下降的形态学的实例

提示细胞质量差的形态学变化

• 分化区域
• 健康的hPSC集落出现少量（5-10％）的自发分化是正常的。但分化区域的增加提示hPSC的质量较差。值得注意的是，细胞可能在特异性标志物表达降低之前出现明显的分化迹象。
• 以下是集落形态不良表现的特征，提示细胞质量下降：
• 自分化区域增多（>10%）
• 失去一致性
• 集落的中心在镜下不发亮或无多层细胞结构
• 失去边界完整性
• 细胞排列不紧密

有关更多信息，请参阅技术手册使用 在mTeSR™Plus（文档编号10000005507）或mTeSR™1（文档编号10000005505）进行人多能干细胞维持培养。如果对您的hPSC形态和质量有疑问，请联系我们的产品和技术支持团队（techsupport@stemcell.com），我们很乐意为您提供帮助。