案例研究

为了提高用于流式叉匹配（FCXM）检测的细胞制备效率，迈阿密大学免疫监测实验室采用了一种自动化免疫磁珠细胞分选系统。本技术公告分享了一个案例研究，使用自动化细胞分选系统如何在不影响检测灵敏度的情况下，通过最小化样本处理和减少获得FCXM检测所需细胞的总时间，来节省技术人员的宝贵时间。

背景介绍

FCXM检测是移植前风险评估的一部分，以促进器官移植研究。该方法评估器官接受者是否具有针对供体人类白细胞抗原（HLA）的抗体，也被称为供体特异性抗体（DSA）。该测定包括将供体淋巴细胞与受体血清混合，并通过流式细胞仪检测DSA。流式细胞术分析时，用识别T细胞和B细胞的荧光染料偶联抗体和识别DSA的抗人IgG抗体染色对样本染色。

使用高纯度的供体淋巴细胞是获得可靠的FCXM检测结果的关键¹。 然而，传统的从供体血液和组织中分离淋巴细胞的方法，如密度梯度离心(DCG)，可能耗时且难以自动化，并导致细胞纯度不一致²。本技术公告讨论了迈阿密大学免疫监测实验室如何采用自动化免疫磁珠细胞制备方法，即使用EasySep™ Direct试剂和RoboSep™仪器，来提高淋巴细胞分选的效率³。

实验方法

通过两种不同的方法从白膜层中分离出淋巴细胞，并比较了它们在FCXM检测中的结果。 第一种方法—手动DGC法——使用Ficoll-Paque®和Leucosep™管通过DGC分离细胞，然后使用Dynabeads® CD15进行手动免疫磁珠法进行粒细胞去除。 第二种方法—自动化RoboSep™—使用 RoboSep™ 仪器（产品号 #21000）和 EasySep™ Direct人总淋巴细胞分选试剂盒（产品号 #19655）进行全自动免疫磁珠细胞分选。通过流式细胞术评估使用两种方法获得的细胞纯度和活率。使用Sysmex®XN-3000™通过全血细胞计数来检测血小板污染。FCXM检测使用细胞和阴性及阳性对照血清样本，按实验室无链素蛋白酶方案进行。

结果与讨论

迈阿密大学免疫监测实验室小组表明，与手动DGC方法相比，自动化RoboSep™方法可获得具有更高纯度的淋巴细胞（图1），无需进行额外的红细胞裂解和粒细胞去除步骤。因此，自动化RoboSep™方法降低了每个样本所需试剂的平均成本，从而为实验室节省了大量成本。

与手动DGC方法相比，使用自动化RoboSep™方法分离的细胞对FCXM检测灵敏度没有影响（图2和3）。所有平均荧光强度值（MFI）均在阳性和阴性对照的预期范围内。使用自动化RoboSep™方法获得的细胞，存在MFI值较高的趋势（图2）。迈阿密大学免疫监控实验室的研究小组将这种趋势归因于细胞样本有较高纯度的淋巴细胞，尽管这一点还需要进行更深入的研究来证实。

除了提供更高纯度的淋巴细胞外，自动化RoboSep™方法花费的时间更少：自动RoboSep™方法需要约1小时，而手动DCG需要约2.5小时（表1）。最重要的是，自动化RoboSep™方法将处理样本和进行细胞分选的有效时间从约2小时减少到了约0.5小时，从而将手动操作时间减少了70％以上。这意味着使用自动化RoboSep™方法可以节省技术人员的宝贵时间，并有助于提高实验室的通量和生产率。

结论

作者得出的结论是，使用自动化RoboSep™方法，即在RoboSep™仪器上使用EasySep™ Direct人总淋巴细胞分选试剂盒，会产生以下结果：

• 与手动DGC方法相比，FCXM结果没有变化。
• 提高了淋巴细胞的纯度，且无需额外的红细胞裂解和粒细胞去除步骤。
• 获得细胞的总时间减少了50％以上：从〜2.5小时减少到〜1小时。
• 最小化样本处理，从而将技术人员的手动操作时间减少了70％以上：从大约2小时减少到大约0.5小时。
• 节省大量成本，并总体上提高了样本的处理效率。

用于流式交叉匹配检测的自动化的淋巴细胞分选

在RoboSep™仪器上使用EasySep™ Direct可以直接从全血种分离未经标记的、高纯度的细胞，无需密度梯度离心、沉降或红细胞（RBC）裂解。获得的高纯度细胞可立即用于下游FCXM检测。使用RoboSep™和EasySep™ Direct进行细胞分离温和、快速且高效，并且适用于存放时间较长的血液样本。

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