外周血单个核细胞 (PBMC) 的传统分离通常费时费力，其首先需要使用密度梯度离心液使血液缓慢分层，然后在关闭刹车的情况下进行30分钟的长时间离心，并使用移液管小心地收集PBMCs。一般来说，整个过程大概需要60分钟左右，并且加样过程需要格外小心以避免样本与密度梯度离心液混合。与之相比，STEMCELL提供的SepMate™ 可以在短短15分钟内快速、高效地从全血中分离PBMCs。SepMate™离心管包含一个特殊插件，将血液与离心液分隔开，离心后具有明显的分层，只需要简单倾倒便能收集到高质量的PBMCs。

本期STEMCELL将详细阐述使用SepMate™从血液中分离单个核细胞的具体实验方案，希望能对您的实验有所帮助。

材料：

• 全血样本
• 密度为1.077 g/mL的密度梯度离心液 (如 Lymphoprep™, 产品号 #07801)
• 含2%胎牛血清的杜氏磷酸盐缓冲液 (DPBS + 2% FBS，产品号 #07905) 或其他合适的培养基
• SepMate™ 管

实验方案：

样品准备：

使用适当的抗凝剂（例如酸性柠檬酸葡萄糖[ACD]或肝素）收集全血。在使用SepMate™之前，全血样本可在室温 (15 - 25°C) 下保存不超过48小时。

使用适当的抗凝剂（例如ACD或肝素）收集骨髓。在使用SepMate™之前，骨髓样本在室温下保存的时间不得超过48小时。

使用SepMate™分离PBMCs

确保样品、推荐培养基（PBS + 2% FBS）、密度梯度离心液和离心机均处于室温（15 - 25°C）。

1. 小心地使用移液器将密度梯度离心液加入到SepMate™插件的孔中。所需体积请参阅表 1。密度梯度离心液会没过插件上方。
   注：移液后密度梯度离心液中可能存在小气泡，这些气泡不会影响性能。

   Table 1.

   SepMate™ 管

   初始样品体积（mL）

   密度梯度离心液体积（mL）

   15

   0.5 - 4

   4.5

   15

   >4 - 5

   3.5

   50

   4 - 17

   15
2. 用等体积的PBS + 2% FBS溶液稀释样品（例如，用5 mL PBS + 2% FBS溶液稀释5 mL样品），并轻轻混合。
3. 保持SepMate™管垂直，沿着管壁将稀释的样品加到管中。样品将与插件上方的密度梯度离心液混合
   注意：不要通过中心孔直接倒入稀释的样品。
4. 在室温下以1200 x g离心10分钟（打开离心机刹车）。对于超过 24 小时的样品，建议离心时间为20分钟。
   注意：不同品牌和型号的离心机在打开刹车时的减速效果可能不同。如果离心后看不到一层MNCs或MNCs的回收率较低，请将减速（即刹车）速率降低至中或低。
5. 将含富集有MNCs的上层溶液倒入新管中。请勿将SepMate™管倒置超过2秒。
   注：

   • 离心后，SepMate™插件表面可能存在一些红细胞 (RBCs)。这些红细胞不会影响性能。
   • 为了减少富集的MNCs中的血小板污染，请在倾倒之前吸走MNC层上方的一些上清液。
6. 用PBS + 2% FBS溶液清洗富集的MNCs，并重复清洗。建议在室温下以300 x g离心8分钟，并打开刹车。若要从富集的MNCs中去除血小板，请在室温下以120 x g进行一次10分钟的清洗，并关闭刹车
   注：如果离心后SepMate™插入件上方的密度梯度离心液呈红色（即某些红细胞尚未沉淀），则可以在打开刹车的情况下将SepMate™管在1200 x g下再离心10分钟。当处理保存时间超过24小时的样本时，此步骤可能是必要的。

*SepMate™ IVD被注册为体外诊断 (IVD) 设备，旨在通过密度梯度离心从人全血或脐带血中分离单个核细胞，在加拿大、美国、欧洲、澳大利亚、巴西和马来西亚等特定地区注册。在其他的地区，SepMate™ RUO 仅供研究使用。 点击了解更多信息。