细胞分选中使用Fc受体阻断剂的重要性
细胞分选中使用Fc受体阻断剂的重要性
在细胞分选中,防止非特异性结合对于确保得到高纯度的富集细胞非常重要。细胞上的Fc受体(FcR)对抗体的Fc区具有高度亲和力。为防止抗体与细胞的非特异性结合,建议细胞分选前在样品中加入Fc受体阻断剂。对于人和小鼠样本,我们的EasySep™细胞分选试剂盒已包含相应的FcR阻断剂。但是,因为没有适用于所有物种的通用阻断剂,如果您使用非人或小鼠样本,必须添加适合您所用物种的阻断剂。
为了获得最佳结果,我们建议在细胞分选时使用以下任一种作为Fc受体阻断剂:
- 使用产生一抗的物种的普通血清。例如,如果使用的是小鼠抗恒河猴CD-x,则应使用普通的小鼠血清,或者,如果使用的是驴抗恒河猴CD-x,则应使用普通的驴血清。通常,5%的血清应足以阻断Fc受体。
- 使用与您感兴趣的物种有交叉反应的抗CD32(FcgRII)或抗CD16/32(FcgR III/II)抗体克隆。例如,如果您使用的是恒河猴样本,可使用。但是,如果将这些抗体用作Fc受体阻断剂,请谨慎使用并确保该抗原不在您感兴趣的细胞类型中表达。如果要分选单核细胞、巨噬细胞、粒细胞或某些淋巴细胞,使用血清可能是更好的选择,因为分选用的抗体的位点(即CD32)会被阻断,导致分选失败。
EasySep™其他物种间接分选试剂盒可用于从任何物种中分选目的细胞。只需使用与Biotin、PE、FITC或APC偶联的一抗抗体标记目的细胞即可。然后,使用相应的EasySep™试剂盒(请参阅下面的试剂盒列表)以及适当的Fc受体阻断剂,以确保分选出高纯度的细胞群。

EasySep™小鼠TIL(CD45)正选试剂盒



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