胃肠道毒性往往是研发治疗药物的限制因素，传统的药物毒性测试所使用的模型大部分为永生细胞系或动物模型，但是这两种方法可能无法反映出真实的临床效果¹。如今类器官技术正处于快速发展阶段，类器官因为具有相对应器官的一定的复杂性和空间结构，所以能够模拟真实器官的部分功能。作为最成熟的类器官技术之一的肠类器官是一种具有高生理相关性的体外细胞模型，可以克服传统方法在研究肠上皮细胞和疾病建模方面的局限性²。因此，本篇文章将为大家带来有效评估新治疗靶点的工具-使用肠道类器官进行毒性测试的操作指南，希望能够给从事相关研究的老师们带来帮助。

材料与试剂

• IntestiCult™ 类器官生长培养基（人）（组分A + 组分B）（产品号 #06010)
• 含25% BSA的PBS缓冲液
• 含15 mM HEPES（产品号 #36254）的DMEM/F-12
• Corning® Matrigel®基质，GFR（Growth Factor Reduced），无酚红（如Corning 356231）
• Costar® 24孔平底板，Tissue Culture-Treated（产品号 #38017）
• Costar® 96孔平底板，Tissue Culture-Treated（如Sigma CLS 3595）
• Falcon® 70 μm细胞过滤器（如Corning 352350）
• Y-27632 (产品号 #72302）
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• STEMvision™ (产品号 #22000）
• CellTiter-Glo® 3D细胞活力检测（Promega 产品号 #G9683）
• D-PBS（不含Ca离子和Mg离子）（产品号 #37350）
• Gentle Cell Dissociation Reagent （产品号 #07174）
• 移液器（如Corning® Lambda™ Plus移液器，产品号 #38060）
• 移液器枪头（如Corning®过滤移液器枪头，产品号 #38034）
• 血清移液管（如Falcon®血清移液管，10 mL，产品号 #38004）
• 测量多孔板吸光度的成像装置（如Promega GloMax®酶标仪）
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实验方案

A. 制备材料和试剂

1. 根据产品信息表中的说明准备完整的IntestiCult™类器官生长培养基（人）。
2. 根据产品信息表中的说明准备DMEM + 1% BSA。
3. 使用前将Costar® Tissue Culture-Treated 24孔板和96孔板在37°C下预热24小时。

B. 类器官扩增s

1. 根据标准方案在24孔板中扩增类器官。大约24孔板中的1个50 uL的胶滴可以接种为96孔板中的8个10uL的胶滴。
   注：这只是估计值，可根据类器官的大小和密度进行调整。
2. 培养类器官7至10天，直到生长至完整尺寸而尚未开始分化和脱落死细胞。
3. 根据产品信息表中的肠道类器官传代的标准方案，直至步骤B.2。
4. 将样品以200 x g离心5分钟。
5. 尽可能去除上清液后，放置在冰上。
6. 将类器官重悬于适量的Matrigel®中并轻轻混匀（每孔10 μL）。
7. 从37°C培养箱中取出预热的96孔板。
8. 从管中取出10 μL类器官-Matrigel®溶液，使用移液器垂直、缓慢地将10 μL液滴添加到培养孔的中心。
9. 对其余样品重复此操作。
10. 将板放回37°C培养箱中。
11. 至少孵育15分钟使Matrigel®凝固。
12. 向每个孔中轻轻添加100 μL IntestiCult™ OGM完全培养基。

C. 药物治疗方案和毒性测试

以上便是使用肠道类器官进行毒性测试的操作指南，希望能够对您的实验有所帮助。此外，点击此处可查看更多肠道类器官在药物毒性上的应用数据。若您想了解更多关于肠道类器官培养或后续应用的信息，欢迎联系我司官方电话400 885 9050或邮箱info.cn@stemcell.com！