针对从少量样本中分离多种细胞的情况，需要进行依次分选，提高细胞的回收率。依次分选适用于嵌合体分析（仅使用少量血液样本，从单一起始样本分离出多种细胞进行谱系特定分析）。

我们大部分的依次分选流程可以从单一样本中分离出三种细胞，如下：

1. 首先用抗体标记需要分离的第一种细胞，被标记的细胞与磁珠相连，吸附在磁极上。含有未经标记的细胞的上清液被转移至新的试管中，用于第二步的细胞分离；
2. 从第一步分选得到的未经标记的细胞悬液可用针对第二种细胞的抗体进行标记。这些标记的细胞如上所述进行分离，而上清液再次被移至新的试流式管中，用于最后一步的细胞分离；
3. 以相同的方式分离第三种细胞，剩余上清液被倾倒后可弃掉。

这个方法适用于几乎所有的细胞的组合。STEMCELL Technologies提供用于HLA实验室的各种组合，但该技术可用于许多应用。

依次分选的技术窍门

• 正选细胞只能使用未经标记的细胞，例如（1）起始样本，（2）正选后倾倒出的细胞悬液，或（3）负选后倾倒出的细胞悬液（含富集的细胞群）。
• 我们推荐先从含量最少的细胞开始（为了减少细胞损失），然后再分离含量较多的细胞（有时这种方法不适用，针对具体的情况请联系我们）。

依次分选的优势

• 可用于体积小的起始样本
• 最大化细胞的回收率
• 可快速简便的分离多种细胞
• 可采用RoboSep™进行自动化的细胞分选，避免交叉污染

关于如何对B细胞、T细胞和髓系细胞进行依次分选和嵌合体分析，请点击.

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