STEMCELL Technologies提供EasySep™ Release间接分选试剂盒用于分离几乎任何种类的细胞。此试剂盒可用于分离被生物素，APC，或PE偶联抗体（试剂盒不包含）标记的细胞。经标记的细胞可被识别生物素、APC或PE的抗体复合物和Release RapidSpheres™所捕捉，进而使用无需分离柱的EasySep™磁极来分离目的细胞。不需要的细胞可被简单倒出，而目的细胞则会留在管中。最后，磁珠被从经EasySep™分离的和被生物素、APC或PE偶联抗体标记的细胞上去除，这些细胞可立刻被用于进行下游实验操作，如流式细胞术、细胞培养或DNA/RNA的提取。

产品说明书（Product Information Sheet, PIS）中列出的建议操作流程是经过优化用于新鲜的或冷冻过的人外周血单个核细胞（PBMCs）、清洗过的白细胞单采术样本或小鼠脾脏细胞，并且适用于多种细胞表面标志物。进一步的实验流程优化可视您具体的实验需求或起始样品来进行定制。以下是一些对操作流程进行优化的技术窍门：

1. 确保细胞是单细胞悬浮液的状态；
2. 在细胞悬浮液中加入物种特异性的阻断剂（blocker）来减少非特异性的结合。更多关于使用Fc受体（FcR）阻断剂的信息，请见我们的技术窍门：在细胞分离中使用FcR阻断剂的重要性。
3. 我们建议根据下面的试剂用量，用滴定法事先测试您的生物素、APC或PE偶联抗体和相应的EasySep™ Release生物素、APC或PE正选抗体混合物：

EasySep™ Release 生物素

一抗

正选抗体混合物

3ug/mL

100µl/mL

1ug/mL

50µl/mL

0.5 ug/mL

25µl/mL

EasySep™ Release PE和APC

一抗

正选抗体混合物

2ug/mL

100µl/mL

1ug/mL

50µl/mL

0.5ug/mL

25µl/mL

*每个表中所列出的条件应在一抗标记后分别进行和不进行清洗步骤，共由6种测试条件。在任何实验条件中EasySep™ Release RapidSpheres™ 50201的浓度均为100 ug/mL。



4. 正选细胞的回收率取决于用于正选的生物素、APC或PE偶联抗体（试剂盒不包含）的质量。过期的或没有正确储存的抗体可能会降低其对目的细胞表面标志物的亲和性，造成低回收率。
5. 在使用EasySep™ Release试剂得到细胞后，抗体复合物会继续结合在细胞表面并可能会和Brilliant Violet™抗体偶联物、聚乙二醇修饰化蛋白或其他化学性质相关的底物发生反应。如果使用了Brilliant Violet™抗体偶联物，应在使用流式细胞术或荧光显微镜前谨慎地使用滴定法测试Brilliant Violet™和EasySep™ Release试剂分离出来的细胞可能发生的化学反应。在使用Brilliant Violet™抗体偶联物进行细胞纯度测试时，我们建议使用BD Horizon Brilliant™染色缓冲液来减少非特异性的反应。
6. 如果用于测试分离细胞纯度的抗体会被初始的筛选抗体所阻断，您应使用其他抗体进行实验。您也可使用能识别细胞上不同位点抗原的抗体（即利用目的细胞表面的另一种标志物来测试细胞纯度），或使用可识别一抗的荧光偶联二抗进行实验（例如GAM-FITC的山羊抗小鼠抗体）。