细胞计数对于分选后的数据分析非常关键。为了得到最准确的结果，有核细胞计数需要使用含亚甲基蓝的3%乙酸。

请观看该视频了解怎样准备样本以便使用血细胞计数板计数细胞。

使用含亚甲基蓝的3%乙酸计算有核细胞总数：

通过这个计数方法可得到样本中的有核细胞总数。乙酸裂解细胞膜后，亚甲基蓝进而标记细胞核。因为成熟红细胞没有细胞核，因此使用此方法计数排除了红细胞。

1. 充分混匀单细胞悬浮液，并使用PBS或无血清溶液适量稀释。为了保证浓度的精确性，至少要在稀释液中加入20 µL细胞原液。
   
   例如：准备10倍稀释液
   • 在微型离心管或者96孔板中加入180 µL含亚甲基蓝的3%乙酸（产品号 #07060）
   • 细胞悬液混匀后，取20 µL加入上一步 µL含亚甲基蓝的3%乙酸的管或孔中。
   
   请注意：经过适量的稀释后，适当的细胞浓度应该在血细胞计数板的每个方格（大的方格）中获得50到100个细胞。我们推荐从10倍稀释开始，但是最适合的稀释浓度取决于起始样本中的细胞数量。
2. 使用干净的盖玻片盖住血细胞计数板。
3. 使用毛细管或者移液枪将一小滴（约10 µL）经染色的细胞稀释液滴加到血细胞计数板上的盖玻片边缘，要小心不要移动盖玻片。
4. 将血细胞计数板置于双筒显微镜上，调节显微镜到10倍镜并聚焦。如图1所示，计算四个外侧方格中每个方格的细胞数（核被染色的细胞），只计算下边和左边压线的细胞，而右边和上边压线的细胞不予计算 （如图2所示）。每次最少计算50个细胞。我们建议每个方格计数大约50-100个细胞。

请注意： 如果每个大方格中的细胞超过100个或少于50个，请使用更大或更小的稀释倍数重新准备稀释样本。

5. 血细胞计数板中九个大方格中的每个方格代表0.1 mm³的体积。因为1 cm³ 等于1 mL，细胞浓度可以用以下公式得出：
   每毫升中有核细胞总数 = 每个方格内细胞的平均数 × 细胞稀释比例 × 10⁴