肿瘤组织本身非常复杂，由表达不同细胞标志物的异质性细胞群体组成。在组织解离过程中保留这些表位的完整性，对于下游应用（如流式细胞术、细胞分选）至关重要——因为标志物的完整性将直接影响数据的准确性和细胞表征。

STEMprep™ 小鼠肿瘤解离试剂盒专为解决解离过程中维持表位完整性而开发。该试剂盒适用于多种肿瘤类型，能够在尽量减少酶解对表面表位影响的同时，获得高得率和高活率的单细胞悬液。为评估其效果，我们检测了 200 多种细胞表面标志物对STEMprep™ 小鼠肿瘤解离酶混合物的敏感性。结果证实，大多数表位在处理后仍能保持完整并可被检测，从而实现可靠的肿瘤细胞表征。

实验方法

取小鼠脾脏、肺脏和骨髓组织，在无酶条件下通过手动处理制备成包含免疫细胞和非免疫细胞的单细胞悬液。将这些细胞与三种肿瘤细胞系（4T1、B16和CT26）混合，以引入肿瘤相关表位（见图1）。所得单细胞悬液包含多种类型的细胞，随后被分成两部分：一部分不作处理，并用CellTrace™ Violet（CTV）染料标记；另一部分则使用STEMprep™小鼠肿瘤解离混合物处理，并在STEMprep™全自动组织处理器中在 37°C 孵育40分钟。随后将两部分样本等比例混合，并使用LEGENDScreen™小鼠PE试剂盒及抗体（包括抗小鼠CD45抗体）进行染色，并通过流式细胞术进行分析。CTV染料可用于区分经酶处理与未经处理的细胞，而CD45抗体则用于区分免疫细胞与非免疫细胞或肿瘤细胞。通过流式细胞术检测荧光强度及阳性细胞群比例的变化，评估STEMprep™小鼠肿瘤解离混合物孵育处理对细胞表面表位完整性的影响。

实验结果

经STEMprep™小鼠肿瘤解离混合物处理后，根据表达水平的变化将评估的表位分为三类：稳定型、中度敏感型和高敏感型。稳定型表位变化极小或几乎无变化；中度敏感型表位信号呈现部分减弱；高敏感型表位则出现显著的表达缺失。共评估了200余种表位（表1），结果显示绝大多数细胞表面表位（88.8%）在与STEMprep™小鼠肿瘤解离混合物孵育后仍然保持稳定并可被检测到。

对于STEMprep™小鼠肿瘤解离混合物敏感的表位，可通过染色条件优化或选用替代克隆号抗体解决方案。更多信息请联系技术支持邮箱：info.cn@stemcell.com。