说明

本操作手册介绍了将人ES或iPS细胞从其他feeder-free培养基转移到mTeSR™ Plus（产品号 #05825）。详细完整流程获取，请访问www.stemcell.com参阅《技术手册：使用mTeSR™ Plus维持培养人多能干细胞》（文档号＃10000005507），或与我们联系以索取副本。以下操作流程引用了上述技术手册的部分章节。

操作流程

1. 用Corning® Matrigel®（第4.2.1节）或Vitronectin XF™（第4.2.2节）包被6孔板。包被后按下图每孔添加2 mL培养基。
   
   
   
   注：做两孔mTeSR™1的平行对照组，直至mTeSR™ Plus的培养体系建立。
2. 用ReLeSR™（第5.1节）或温和细胞解离试剂（第5.2节）制备细胞聚集体。
3. 接种细胞：
   • 培养板的第1列，使用mTeSR™1培养基的接种密度进行传代。
   • 培养板的第2列，使用mTeSR™1培养基的接种密度进行传代。
   • 培养板的第3列，降低25%的接种密度进行传代。
4. 轻快地前后左右晃动培养板，使细胞分布的更均匀。37℃孵育24小时。
5. 按照每孔使用培养基的情况，更换培养基。每1到2天观察以下细胞的生长情况，
   • mTeSR™1：每天更换一次培养基
   • mTeSR™ Plus：每1到2天更换一次培养基，需要每2天更换培养基，请加入2倍体积的培养基。
6. 根据观察细胞的生长情况（第3.2节），准备传代细胞。mTeSR™ Plus培养的细胞由于长得更快可能需要更早地传代。
7. 传代mTeSR™ Plus培养的细胞时，参照之前的传代密度。如果观察到细胞生长过快，可以将铺板密度降低20%。
   
   注：解离孵育的时间需要根据实际情况相应调整；使用非酶传代试剂时应该在显微镜下观察细胞解离情况，确定最佳时间。

一旦熟悉了该操作流程，就可以通过更改细胞聚集体大小（第6.3节）或铺板密度（第6.4节）来调整细胞的传代时间。

过渡到mTeSR™ Plus培养后的前1-2代，细胞可能会经历自发分化的增加。 手动或使用专门的解离试剂（例如ReLeSR™）（第5.1节）去除分化区域将有助于确保培养物快速适应新环境，而不影响培养物的长期健康。

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